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浅析胎牛血清透析操作方法

点击次数:54 发布时间:2021-11-05
  胎牛血清透析生产工艺优势:
  该透析采用的是切向流过滤。切向流是指液体流动方向与过滤方向呈垂直方向的过滤形式。该方式使液体流动在滤膜表面产生剪切力,减小了滤膜上的物质堆积,保证了稳定的过滤速度。
  胎牛血清在无菌条件下要经过0.1微米膜三重过滤,要进行一系列的检测,包括理化性质检查,成分检查、外源因子检查以及促进细胞增殖的检查等。
  由于不可能监测全部小分子,因此常选用葡萄糖为代表。血清中葡萄糖<5 mg/dL,即可以停止透析了。透析过程中,除监测葡萄糖浓度外(可采用葡萄糖氧化酶方法测定),还需仔细监测pH值和渗透压。

  胎牛血清透析操作方法:
  1、固定:培养细胞的制片或冰冻切片用4%多聚甲醛固定30min(4℃)后,用80%酒精再固定2h(-20℃)。常规4%中性福尔马林固定、石蜡包埋之切片进行脱蜡、水化。
  2、洗涤:玻片浸入PBS缓冲液,摇床上洗涤5min,三次。
  3、反应:洗涤后的玻片用吸水纸吸干细胞或组织周围水分,按50μl/cm2滴加反应液,使反应液均匀地覆盖于所有细胞或组织切片上,盖上塑料盖玻片,置湿盒中,37℃孵育1h。
  4、终止反应:去掉塑料盖玻片,将玻片置盛有洗涤缓冲液的染色缸内,洗涤两次,每次5min。
  5、FITC标记:洗涤后的玻片用吸水纸吸去细胞或组织周围水分,按50μl/cm2滴加FITC反应液,室温下避光孵育10min。
  6、洗涤:将玻片置于洗涤缓冲液内,洗两次,每次5min。
  7、PI复染:将玻片置于盛有PI染液的染色缸内,室温下避光染色30min。
  8、封片:用盖玻片直接盖在含PI染液的玻片上,亦可用无色指甲油涂于盖玻片四周边缘,置暗盒中,尽早镜检观察。
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